纯化水是一种用于产品生产的原辅料及清洁用水，影响着产品质量问题。纯化水微生物限度检查是确保纯化水水质的重要环节注意，因此需按照《中国药典》进行检查，该标准每5年更新一次，目前是按照2020年版纯化水微生物限度检查的要求进行检查。

纯化水微生物限度检查步骤

第一步:菌液的制备
取铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌工作用菌种挑取少量培养物接种至10ml 胰酪大豆胨液体培养基中，30~35℃培养18~24小时。取该新鲜培养液1ml加入至0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍梯度稀释至10-5~10-8，制成每1ml含菌数不大于100cfu的菌悬液。
第二步:供试液的制备
供试品：纯化水
冲洗液：pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液
1）试验组：吸取1ml供试液注入滤杯中，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml进行过滤冲洗，分别在冲洗液中加入上述2种菌液各1ml过滤，滤干后，将薄膜用镊子夹到已凝固的R2A琼脂培养基上，平行制备2个平皿。在30~35℃培养5天，观察结果，测定所加入的试验菌数。
2）供试品对照组：取供试液1ml，以稀释液代替菌液同试验组操作。每个样品各制备2个平皿。在30～35℃培养5天，观察结果，测定供试品的菌数。
3）菌液对照组：取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液，按试验组操作加入试验菌液平行制备2个平皿。在30~35℃培养5天，观察结果，测定其菌数。
4）稀释剂对照组：取100ml pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液注入滤杯，加入上述2种菌液各1ml进行过滤，滤干后，将薄膜用镊子夹到已凝固的R2A琼脂培养基上。平行制备2个平皿。在30~35℃培养5天，观察结果，测定其菌数。
第三步：试验结果分析
1）计数方法适用性试验进行3次独立平行试验(分别使用不同取样点的纯化水)，并分别计算各试验菌每次回收试验的比值，应在50%~200%范围内。
2）试验组菌数回收率（%）=试验组的平均菌数-供试品对照组的平均菌数/菌液对照组的平均菌数×100%
3）稀释剂对照组回收率（%）=稀释剂对照组的平均菌数/菌液对照组的平均菌数×100%
第四步：偏差处理情况
验证的数据产生的任何偏差，应及时进行偏差调查，按照《偏差管理规程》进行处理并如实记录，给出合理的偏差处理措施，并上报验证领导小组，记录备案，并且根据处理措施进行相应的处理，并对处理的过程、结果进行记录与跟踪。

检测标准

中华人民共和国药典2020版二部 纯化水 微生物限度P714

检测流程

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